多肽凍干粉主要由：肽類物質(zhì)（目的肽、雜肽）、結(jié)合的鹽離子、水份組成。
肽的純度是指在波長214nm時(shí)樣品中目的肽所占肽類物質(zhì)的比例，樣品中可能含有缺失序列、短片段、脫保護(hù)不完全的序列等等。肽的純度是在肽的最大吸收峰214nm處由HPLC分析而得到的，肽中所含有的水份和鹽份，未在肽的純度中體現(xiàn)。
肽的含量是指所有肽類物質(zhì)在樣品中所占的百分比，樣品中包含所有的肽及水分、鹽分等，肽的含量可通過氨基酸分析得到。
根據(jù)總重和HPLC分析的純度以及氨基酸分析結(jié)果，樣品中目的肽的含量是如何確定的呢？一般多肽的重量是以總重來計(jì)算的，也就是肽凍干后的實(shí)際重量，其中包括在凍干過程中，其它非肽類雜質(zhì)如殘留的水分、來自帶相反電荷離子的鹽分等的重量。即多肽重量為：總重*多肽含量（氨基酸分析所得結(jié)果）?！∧康碾牡慕^對含量是指在樣品中目的肽的純度與其含量的乘積，即目的肽的含量=總重*多肽含量*多肽純度。
多肽的含量可以通過氨基酸分析而得，也可以通過計(jì)算獲得其理論值。
通常多肽中含有3-5%的水份。
鹽份可按下列方式計(jì)算。例如多肽結(jié)合的為陰離子其分子量為m（比如三幅乙酸根，分子量為114），多肽的分子量為MW，多肽序列中含有n個(gè)堿性基團(tuán)（包括N端的NH2），則一個(gè)多肽分子理論上可結(jié)合n個(gè)陰離子。其鹽份含量=n*m/（n*m+MW）
多肽含量=1-水份含量-鹽份含量=1-（3%~5%）- n*m/（n*m+MW）。
同理，如果多肽結(jié)合的是陽離子，需要計(jì)算多肽中酸性基團(tuán)的個(gè)數(shù)。
如果您需要半定量實(shí)驗(yàn)，可以通過理論計(jì)算獲得多肽含量數(shù)據(jù)；如果您的實(shí)驗(yàn)需要精確定量，建議購買氨基酸分析服務(wù)，以便獲得更精確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
藥物多肽的檢測與分析
由于多肽化合物的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)的特點(diǎn)，用于定性及定量分析普通有機(jī)化合物的許多常規(guī)方法：熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、紅外光譜、核磁共振譜等均不能很好的對多肽進(jìn)行分析。因此，多肽化合物作為藥物時(shí)一般不以上述分析數(shù)據(jù)為純度及結(jié)構(gòu)確證的依據(jù)。在多肽分子的立體化學(xué)分析方面，越來越多地采用旋光色散（ORD）、圓二色散（CD）及二維核磁共振譜進(jìn)行分析。它們可以深入地闡明肽鍵的二級以至三級結(jié)構(gòu)。這些研究對分析肽的立體化學(xué)尤其是整體構(gòu)象與生物活性之間的關(guān)系是很有意義的，但在藥品質(zhì)量評審上尚不被列入標(biāo)準(zhǔn)。詳細(xì)的肽立體化學(xué)與IR、UV、ORD及CD分析的關(guān)系已在彭師奇教授的<<多肽藥物化學(xué)>>一書均有描述，此處不再重復(fù)。下面僅就適于肽化合物質(zhì)量控制的幾種必須的分析手段予以簡介。
⑴ 質(zhì)譜（MS）分析
由于紅外、紫外及核磁共振分析對大分子量的多肽化合物進(jìn)行質(zhì)控的作用不明顯，分子量檢測對肽的質(zhì)量控制就顯得格外重要。因?yàn)殡逆溤谝话愕馁|(zhì)譜轟擊條件下很容易斷開，很難得到完整的分子峰，所以常常用條件溫和的FAB-MS、ESI-MS、MALDI-TOF……等方式進(jìn)行肽化合物的質(zhì)譜分析。從一張合格的MS分析圖譜上不但可以證明產(chǎn)物的分子量，而且也可從其他雜峰的存在與否評價(jià)主產(chǎn)物的純度。
有時(shí)，由于多肽的目標(biāo)產(chǎn)物與雜質(zhì)的MS非常接近，特別是脫酰胺的雜質(zhì)與產(chǎn)品的MS只相差1，因此，對于原料藥多肽產(chǎn)品采用高分辨率質(zhì)譜進(jìn)行質(zhì)控是非常必要的。
⑵ HPLC分析
肽分析中的AAA及MS數(shù)值主要用在結(jié)構(gòu)證明即定性方面。只有進(jìn)行HPLC分析才能得知肽產(chǎn)物的具體純度。應(yīng)該注意的是，主峰的保留時(shí)間（R.T.）不宜過短（如小于8分鐘）。這種情況下，一些雜質(zhì)峰（如果存在的話）可能與主峰并在一起，無法有效分離。因此，主峰RT值適中的分離條件是質(zhì)檢的合理?xiàng)l件。HPLC分析的另一功用是也可以定性。當(dāng)合成肽為已知物（如仿制藥）時(shí)，就可以與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行各自注射比較或混和同注射（co-injection）比較，確認(rèn)產(chǎn)物含量情況、保留時(shí)間是否與標(biāo)品一致。
⑶ 序列分析
肽的一級結(jié)構(gòu)除了各殘基的含量組成外，各殘基之間鍵合的順序是必須要加以證明的。例如下面兩個(gè)肽:H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met–OH（A肽）、H-Tyr-Gly-Met-Phe-Gly-OH（B肽），它們的結(jié)構(gòu)組成相同，因而氨基酸分析及質(zhì)譜分析結(jié)果均一致。（當(dāng)然，他們在HPLC分析中的保留時(shí)間可能不同）其中A肽是具有免疫調(diào)節(jié)活性的，而B肽卻沒有什么生物活性。因此肽的序列連接情況不同，其理化性質(zhì)及生物活性有很大區(qū)別。值得指出的是，從動(dòng)、植物及人體分離出的肽必須進(jìn)行序列分析，作為結(jié)構(gòu)測定的重要依據(jù)之一。但化學(xué)合成的肽則不需要序列分析。因?yàn)楹铣晒に囍械姆磻?yīng)路線已經(jīng)把各殘基的連接順序明確了，不可能出現(xiàn)上述A肽與B肽共存的情況。
通常我們可以采用Edman降解方法進(jìn)行肽序列的測定。
⑷ 比旋光度[α]
常見氨基酸中，除了Gly殘基以外，其余氨基酸均含有手性C原子，因此每個(gè)肽化合物均有特定的[α]值。在相對分子質(zhì)量為500以下的寡肽分子中一級結(jié)構(gòu)為主體，因此其[α]值是必須的質(zhì)量依據(jù)之一。但當(dāng)肽鏈長度達(dá)八個(gè)殘基（有的文獻(xiàn)認(rèn)為六個(gè)殘基）以上時(shí)就開始出現(xiàn)了二級以上的結(jié)構(gòu)。此時(shí)每個(gè)殘基中的α-C（即手性C）原子對整個(gè)分子的旋光貢獻(xiàn)也不是僅有的因素了。分子內(nèi)的二或三級結(jié)構(gòu)會(huì)給肽分子帶來新的不對稱環(huán)境，而且這些不對稱性又往往與濃度、分子間締合程度、溶劑及溫度等因素有關(guān)。例如，生長抑素十四肽（Somatostatin14）的[α]值在不同批號之間竟相差20度之多。因此，在各國的藥典及新藥質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)中已不把[α]值作為必要的內(nèi)容。
⑸ 氨基酸組成的分析（AAA）
它可以準(zhǔn)確地表達(dá)肽鏈殘基種類數(shù)量的構(gòu)成。因?yàn)槿绻铣芍心骋徊交驇撞娇s合不完全，就可能導(dǎo)致殘缺肽（delation peptides）存在。尤其是采用固相合成方式，這些殘缺肽不可能被及時(shí)清除，往往在最終裂解后與目標(biāo)肽混在一起。而且因理化性質(zhì)與目標(biāo)肽很接近而難以完全分開。此時(shí)AAA值提供的各種氨基酸之間含量比就可以判斷出殘缺肽的存在及哪種殘基缺失了。一般的標(biāo)準(zhǔn)為各氨基酸檢測值與理論值偏差在5%之內(nèi)是允許的。